Lui-kafe.ru

Кафе "Луи"
0 просмотров
Рейтинг статьи
1 звезда2 звезды3 звезды4 звезды5 звезд
Загрузка...

Большинство патогенных микроорганизмов выращивают

Сборник тестов по Микробиологии с ответами

Перечень тестовых заданий. Правильные ответы обозначены » * «

1) К микроорганизмам, не имеющим клеточного строения, относятся:

2) Впервые увидел бактерии:

3) Бактерии, питающиеся за счет готовых органических соединений:

4) Бактерии, использующие для построения своих клеток диоксид углерода и другие органические соединения:

5) Нитрифицирующие бактерии являются:

6) Основным регулятором поступления органических веществ в клетку является:

*1. цитоплазматическая мембрана

7 — Тест) Микроорганизмы, которые приспособились в процессе эволюции к низким температурам:

8) Микроорганизмы одного вида или подвида, выращенные в лабораторных условиях на искусственных питательных средах:

*1. чистая культура

2. смешанная культура

9) Микроорганизмы почвы, способные получать необходимую им энергию от окисления минеральных соединений:

10) Обрабатывание мазка хромовой кислотой, карболовым фуксином Пиля и окрашивание метиленовым синим характерно для:

1. метода Шеффера-Фултона

*2. метода Меллера

3. метода Муромцева

4. метода Романовского-Гимза

11) Обрабатывание мазка раствором малахитовой зелени и дополнительное окрашивание водным раствором сафранина характерно для:

1. метода Меллера

2. метода Муромцева

3. метода Романовского-Гимза

*4. метода Шеффера-Фултона

12) Бактерии, имеющие на одном или обоих концах тела пучок жгутиков, называются:

13) Скопления бактерий, напоминающие внешне грозди винограда, называются:

14) В процентном соотношении вода в микробной клетке составляет:

15) О свежем фекальном загрязнении почвы свидетельствует обнаружение:

3. яиц гельминтов

16) При загрязнении органическими веществами в почве обнаруживают микроорганизмы:

*2. семейства кишечных бактерий

3. паратифа А и В

17) Плесневый гриб, имеющий мицелий белого цвета с перегородками:

1. шоколадная плесень

2. гроздевидная плесень

3. головчатая плесень

*4. молочная плесень

18) По окончании работы лицевые части противогазов и респираторов необходимо тщательно мыть:

1. 0,1-%-м раствором перманганата калия

2. 5-%-м раствором соды

*3. 2-%-м раствором соды

4. 0,5-%-м мыльным раствором

20) К химическим средствам дезинфекции относятся:

1. термофильные микробы

*2. фенолы и креоны

21) Для чистой почвы коли-титр кишечной палочки должен составлять:

2. не более 10 мг

22) Для определения количества живых бактерий в нитрагине делают глубинный посев:

1. на маннитный агар-агар

*2. на бобовый агаг-агар

3. на дрожжевой агар-агар

4. на мясопептонный агар-агар

24) Для борьбы с плесенью используют:

*4. оксидифенолят натрия

25) Перитрихи-это бактерии:

1. с полярно расположенными пучками жгутиков

*2. со жгутиками по всей поверхности клетки

3. не имеющие жгутиков

4. с двумя полярными жгутиками

26) К осветительной системе биологического микроскопа не относится:

27. Тест. ) К прямым санитарно-биологическим показателям эпидемической опасности почвы относятся:

1. обнаружение яиц гельминтов и их личинок

2. обнаружение сальмонелл и бактерий паратифа А и В

3. обнаружение стафилококков и стрептококков

*4. обнаружение патогенных энтеробактерий и энтеровирусов

28) Актиномицеты-это:

2. палочковидные бактерии

*3. ветвящиеся бактерии

30) Для изучения морфологии плесневых грибов препараты готовят:

1. методом Шеффера-Фултона

2. методом Меллера

3. методом висячей капли

*4. методом раздавленной капли

31) Хранение пестицидов должно происходить в специально оборудованных складах на расстоянии от населённого пункта:

1. не менее 50 м

2. не менее 100 м

*3. не менее 200 м

4. не менее 500 м

32) Антибиотикограмма — это:

*1. определение чувствительности микробов к антибиотикам

2. определение чувствительности антибиотиков к микробам

3. определение чувствительности животных к антибиотикам

4. определение чувствительности растений к антибиотикам

33) Дезинфицирующее средство имеет бактериостатическое действие, когда оно:

*1. задерживает при определённых условиях рост микроорганизмов, но не приводит к их гибели

2. способно убить микробную клетку

3. вызывает в микробной клетке биохимические изменения

4. вызывает в микробной клетке морфологические изменения

34) К основным группам микроорганизмов не относятся :

35) Отдалённая корневая микрофлора растений располагается :

1. в радиусе 6-10 см от корней

2. в радиусе 2-3 м от корней

*3. в радиусе 50 см от корней

4. в радиусе 1 м от корней

36) Конечными продуктами разложения органических веществ анаэробными микроорганизмами являются:

1. углекислый газ и вода

2. молочная кислота и спирт

3. клетчатка и лигнин

*4. кислоты и спирты

37) При работе с инсектицидами необходимо использовать респираторы:

1. «Лепесток-200», У-2К

Тест № 38) Для дезинфекции почвы в парниковых хозяйствах используют:

4. бромид метила

39) Термофилы-это бактерии, развивающиеся при температуре:

1. 30-40 градусов

*3. 50-70 градусов

4. 70-80 градусов

40) Микроорганизмы, занимающие промежуточное положение между плесневыми грибами и бактериями:

41) Система мероприятий по уничтожению патогенных или условно-патогенных микроорганизмов во внешней среде или на теле животного:

42) Бактерии, образующие цепочку при делении кокков:

43) Олиготрофные микроорганизмы почвы — это:

*1. микроорганизмы, способные ассимилировать органические соединения из растворов низкой концентрации

2. микроорганизмы, способные получать необходимую им энергию от окисления минеральных соединений

3. микроорганизмы, разлагающие органические соединения растительного и животного происхождения

4. микроорганизмы, способные разлагать перегнойные соединения почвы

44) Бактерии по типу дыхания подразделяются на:

1. олиготрофы и сапрофиты

2. анаэрофобы и анаэрофаги

3. аэрофобы и анаэрофобы

*4. аэробы и анаэробы

45) О возможности загрязнения почвы патогенными энтеробактериями свидетельствует индекс санитарно-показательных микроорганизмов БГКП (колиформ) и энтерококков в колличестве:

1. до 10 клеток на 1 г почвы

*2. 10 и более клеток на 1 г почвы

3. до 100 клеток на 1 г почвы

4. 10 и более клеток на 10 г почвы

46) К физическим средствам дезинфекции относятся:

1. соли тяжелых металлов

2. термофильные микробы

*3. гамма лучи и ультразвук

4. патогенные грибы

47) Метод, позволяющий определить минимальную концентрацию антибиотика, подавляющего рост исследуемой культуры бактерий:

1. метод диффузии в агар

*3. метод серийных разведений

49) Извитые бактерии, имеющие тонкие многочисленные завитки:

50) Один из первых микроскопов изобрел в 1610 году:

51) Микроорганизмы, разлагающие органические соединения растительного и животного происхождения — это:

53) При окрашивании препарата по методу Муромцева микробная клетка окрашивается:

1. в голубой цвет

2. в бледно-розовый цвет

3. в фиолетовый цвет

*4. в темно-синий цвет

54) Микроорганизмы, развивающиеся на поверхности растений, называются:

56) Микробы, поражающие и подавляющие растения, являются:

57 Тест.) Для количественного учета почвенных микроорганизмов используют:

1. аппликационный метод

*3. метод питательных пластин в сочетании с методом последовательных разведений

Глава 5.

МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. ИЗУЧЕНИЕ КУЛЬТУРАЛЬНЫХ И БИОХИМИЧЕСКИХ

Культивирование, то есть выращивание микроорганизмов в ла­боратории, применяется для изучения их свойств и для получения био­массы. Бактерии, грибы, актиномицеты, спирохеты и некоторые про­стейшие культивируются на питательных средах. Хламидии, риккетсии, вирусы и некоторые простейшие способны размножаться только в орга­низме животного или в живых клетках.

Культуральные свойства данного вида микроорганизмов — это: 1) условия, необходимые для размножения, и 2) характер роста на пита­тельных средах. Культуральные свойства — это одна из характеристик, которые учитываются при идентификации (определения вида) микро­организмов.

Питательные среды

Питательные среды должны соответствовать определенным тре­бованиям. Они должны содержать все питательные вещества, необхо­димые для размножения данного вида микробов. Одни патогенные мик­роорганизмы растут на простых питательных средах, другие для свое­го размножения нуждаются в добавлении крови, сыворотки крови, ви­таминов.

В питательных средах должны быть созданы определенные условия путем добавления хлорида натрия или буферных растворов. Для боль­шинства бактерий благоприятной является питательная среда, со­держащая 0,5% хлорида натрия. Реакция питательной среды, благоп­риятная для большей части патогенных бактерий — слабощелочная, что соответствует рН=7,2-7,4. Холерный вибрион растет при рН=7,8-8,5, гри­бы — при рН=5-5,5. Питательные среды должны быть влажными, то есть содержать достаточное количество воды, быть по возможности прозрач­ными и стерильными, то есть до посева не содержать микробов.

По составу и происхождению питательные среды бывают естест­венные, искусственные и синтетические. Естественные питательные среды — это натуральный продукт, например, картофель, другие ово­щи. Искусственные питательные среды готовят по определенной про­писи из продуктов с добавлением органических и неорганических со­единений. Синтетические среды содержат определенные химические соединения в известных концентрациях.

По консистенции питательные среды бывают жидкие, полужид­кие, плотные. В качестве уплотнителя обычно применяют агар-агар -полисахарид, выделенный из морских водорослей. Агар-агар не используется микроорганизмами в качестве питательного вещества, образует в воде гель, плавящийся при 100°С и застывающий при 45°С.

Для получения плотной питательной среды агар-агар добавляют в кон­центрации 1,5-2%, для полужидкой — 0,5%.

По целевому назначению питательные среды могут быть разде­лены на обычные (простые), специальные, элективные, дифференци­ально-диагностические.

Обычные (простые) питательные среды применяют для культиви­рования большинства микроорганизмов, это мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА).

Специальные питательные среды применяют для культивирования микроорганизмов, которые не растут на простых средах. Например, кровяной агар и сахарный бульон для стрептококка, сывороточный агар для менингококка и гонококка.

Элективные питательные среды используют для выделения одного какого-либо вида из смеси различных бактерий. Данный вид бактерий растет на этой среде быстрее и лучше других, опережая их в своем росте; рост других бактерий задерживается на этой среде. Например, свернутая сыворотка для палочки дифтерии, щелочная пептонная вода для холерного вибриона, желчный бульон для палочки брюшного тифа, солевые среды для стафилококка.

Дифференциально-диагностические питательные среды применя­ются для отличия одних видов бактерий от других по их фермента­тивной активности (см. соответствующий раздел).

Культивирование и выделение чистых культур аэробных бактерий

Для культивирования микроорганизмов необходимы определенные условия: температура, аэробные или анаэробные условия.

Температура должна быть оптимальной для данного вида. Боль­шинство патогенных бактерий размножаются при 37°С. Однако для некоторых видов оптимальной является более низкая температура, что связано с особенностями их экологии. Так, для палочки чумы, ес­тественным местом обитания которой являются грызуны в период зимней спячки, оптимум температуры составляет 28°С, как и для лептоспир, для палочки ботулизма — 28°С-35°С.

Кроме оптимальной температуры, для культивирования микроор­ганизмов, в зависимости от вида, необходима аэробность или анаэ-робность среды.

Для того, чтобы изучить морфологию, Культуральные, биохими­ческие и другие свойства микробов, необходимо получить чистую куль­туру. Обычно культурой микробов называют скопление их на пи­тательной среде в виде помутнения, придонного (пристеночного) рос­та или пленки на поверхности жидкой среды или колоний на плотной среде. Отдельная колония образуется из одной микробной клетки. Чи­стая культура — это культура микробов одного вида, полученная из од­ной колонии. В лабораториях для различных исследований применя­ют определенные известные штаммы микробов. Штамм — это чистая культура микробов, полученная из определенного источника, в опре­деленное время, обладающая известными свойствами. Как правило, штаммы микробов обозначают определенным номером. Например, штамм Staphylococcus aureus 209P применяется для определения актив­ности пенициллина.

Выделение чистых культур аэробов занимает, как правило, три дня и производится по следующей схеме:

1-й день — микроскопия мазка из исследуемого материала, ок­рашенного (обычно по Граму) — для предварительного ознакомления с микрофлорой, что может быть полезным в выборе питательной среды для посева. Затем посев материала на поверхность застывшего пита­тельного агара для получения изолированных колоний. Рассев можно произвести по методу Дригальского на три чашки Петри с питательной средой. Каплю материала наносят на первую чашку и распределяют шпателем по всей чашке. Затем этим же шпателем распределяют остав­шуюся на нем культуру на второй чашке и таким же образом — на тре­тьей. Наибольшее количество колоний вырастет на первой чашке, наи­меньшее — на третьей. В зависимости от того, сколько было микробных клеток в исследуемом материале, на одной из чашек вырастут изоли­рованные колонии.

Такого же результата можно достигнуть, произведя рассев на од­ной чашке. Для этого делят чашку на четыре сектора. Исследуемый материал засевают бактериологической петлей штрихами на первом секторе, затем, прокалив и остудив петлю, распределяют посев из пер­вого сектора во второй и таким же образом последовательно в тре­тий и четвертый сектор. Из отдельных микробных клеток после су­точного инкубирования в термостате образуются изолированные колонии.

2-й день — изучение колоний, выросших на чашках, описание их. Колонии могут быть прозрачными, полупрозрачными или непроз­рачными, они имеют различные размеры, округлые правильные или неправильные очертания, выпуклую или плоскую форму, гладкую или шероховатую поверхность, ровные или волнистые, изрезанные края. Они могут быть бесцветными или иметь белый, золотистый, красный, желтый цвет. На основании изучения этих характеристик выросшие колонии разделяются на группы. Затем из исследуемой группы отби­рают изолированную колонию, готовят мазок для микроскопического исследования с целью проверки однородности микробов в колонии. Из этой же колонии производят посев в пробирку со скошенным пита­тельным агаром.

3-й день — проверка чистоты культуры, выросшей на скошенном агаре путем микроскопии мазка. При однородности исследуемых бак­терий выделение чистой культуры можно считать законченным.

Читать еще:  Как правильно выращивать викторию и как за ней ухаживать?

Для идентификации выделенных бактерий изучаются культураль-ные признаки, то есть характер роста на жидких и плотных пита­тельных средах. Например, стрептококки на сахарном бульоне образуют придонный и пристеночный осадок, на кровяном агаре — мелкие, точечные колонии; холерный вибрион образует пленку на поверхности щелочной пептонной воды, а на щелочном агаре — прозрачные коло­нии; палочка чумы на питательном агаре образует колонии в виде «кру­жевных платочков» с плотным центром и тонкими волнистыми края­ми, а в жидкой питательной среде — пленку на поверхности, а затем -нити, отходящие от нее в виде «сталактитов».

Культивирование и выделение чистых культур анаэробных бактерий

Для культивирования анаэробов необходимо понизить окисли­тельно-восстановительный потенциал среды, создать анаэробиоз пу­тем удаления кислорода физическими, химическими или биологичес­кими методами.

К физическим методам можно отнести:

1) механическое удаление воздуха с помощью насоса из анаэ-ростата, в котором помещают чашки с посевами. Одновременно мож­но заменить воздух индифферентным газом: азотом, водородом, угле­кислым газом.

2) выращивание в среде, содержащей редуцирующие вещества. Сре­да Китта-Тароцци — это сахарный бульон с кусочками печени или мяса. Глюкоза и кусочки органов обладают редуцирующей способностью. Среду заливают сверху слоем вазелинового масла, чтобы преградить доступ кислорода воздуха.

3) Наиболее простой, но менее надежный способ — выращивание в глубине высокого столбика сахарного агара.

Химические методы заключаются в том, что чашки с посевами ана­эробов ставят в герметически закрытый эксикатор, куда помещают хи­мические вещества, например, пирогаллол и щелочь, реакция между которыми идет с поглощением кислорода.

Биологический метод основан на одновременном выращивании анаэробов и аэробов на плотных питательных средах в чашках Пет­ри, герметически закрытых после посева. Вначале кислород погло­щается растущими аэробами, а затем начинается рост анаэробов.

Выделение чистой культуры анаэробов начинают с накопления анаэробных бактерий путем посева на среду Китта-Тароцци. В даль­нейшем получают изолированные колонии одним из двух способов:

1) посев материала производят путем смешивания с расплавленным теплым сахарным агаром в стеклянных трубках. После застывания ага­ра в глубине его вырастают изолированные колонии, которые извле­кают путем распила трубки и пересевают на среду Китта-Тароцци (спо­соб Вейнберга);

2) посев материала производят на чашки с питательной средой и инкубируют в анаэростате. Выросшие на чашке изолированные ко­лонии пересевают на среду Китта-Тароцци (способ Цейсслера).

Культивирование других микроорганизмов

Культивирование микоплазм

Микоплазмы культивируются на питательных средах с добавле­нием сыворотки и углеводов. Поскольку микоплазмы лишены клеточ­ной стенки, они растут только в изотонических или гипертонических средах. На плотных питательных средах в течение нескольких суток образуются очень мелкие колонии, напоминающие яичницу-глазунью — с выпуклым центром и плоской полупрозрачной периферией. Микоп­лазмы можно выращивать также на курином эмбрионе или культуре клеток.

Культивирование риккетсий и хламидий

Риккетсии и хламидий — облигатные внутриклеточные паразиты. Для их культивирования используют культуры клеток, куриный эмбри­он и заражение животных.

Культивирование грибов

Для культивирования грибов применяют плотные и жидкие пита­тельные среды: чаще всего среду Сабуро, а также среды, содержащие пивное сусло. Грибы растут медленнее, чем бактерии, они образуют видимый рост в течение нескольких суток. Температура культивиро­вания ниже, чем у бактерий — 22-30°С.

Культивирование спирохет и простейших

Среди спирохет наиболее легко выращивать лептоспиры, пита­тельной средой для которых может служить вода с примесью сыво­ротки крови кролика. Боррелии и трепонемы культивируют в анаэ­робных условиях на более сложных питательных средах, содержащих сыворотку, кусочки тканей животных.

Среди простейших культивируются на питательных средах ди­зентерийная амеба, лямблии, трихомонады, лейшмании, трипаносомы, балантидии.Токсоплазмы культивируют в куриных эмбрионах и куль­турах тканей. Методы культивирования малярийных плазмодиев разрабатываются.

Методы изучения ферментативной активности (биохимических свойств)

В микробиологической практике изучение ферментативной ак­тивности используют для идентификации микроорганизмов, посколь­ку каждый микробный вид обладает определенным набором фермен­тов.

Для определения протеолитической активности микробы засева­ют уколом в столбик желатина и после 3-5 суток инкубирования при комнатной температуре отмечают характер разжижения желатина: в виде воронки, гвоздя, чулка или в виде опрокинутой елки. Протеолитическую активность определяют также по образованию продуктов разложения белка: индола, сероводорода, аммиака. Для их определения засевают микроорганизмы в мясо-пептонный бульон, и между горлыш­ком пробирки и ватной пробкой помещают индикаторные бумажки, исключая их контакт со средой. При образовании индола бумага, про­питанная насыщенным раствором щавелевой кислоты, приобретает розовый цвет; в присутствии сероводорода бумага, пропитанная аце­татом свинца, чернеет; при образовании аммиака красная лакмусо­вая бумажка синеет.

Для определения сахаролитических свойств микробов применяют дифференциально-диагностические среды такие, как среды Гисса, среда Олькеницкого, среда Эндо, среда Левина, среда Плоскирева.

Среды Эндо, Левина, Плоскирева в чашках Петри применяются для дифференцировки бактерий кишечной группы по их способности сбраживать лактозу. Эти среды содержат питательный агар, лактозу и индикатор, изменяющий свой цвет в кислой среде — индикатор рН. Если посеять на такую среду бактерии, которые сбраживают лактозу, на­пример кишечную палочку, то в результате сбраживания лактозы об­разуется кислота, и индикатор изменит свой цвет в кислой среде. По­этому колонии кишечной палочки на таких средах будут окрашенны­ми соответственно цвету индикатора: на среде Эндо и среде Плоски­рева — в красный цвет, на среде Левина — в черно-синий. Колонии бак­терий, не сбраживающих лактозу, таких как сальмонеллы и палочки дизентерии, будут бесцветными.

Среды Гисса (среды «пестрого ряда») готовятся на основе пептон-ной воды или полужидкого мясо-пептонного агара. Содержат какой-либо один углевод или многоатомный спирт и индикатор. При росте на среде Гисса микроба, сбраживающего данный субстрат с образо­ванием кислоты и газа, среда изменит цвет, в полужидкой среде по­явятся пузырьки и разрывы в толще агара, в жидкой среде — пузырек газа в стеклянном поплавке. При сбраживании субстрата только до кислоты происходит лишь изменение цвета среды.

Применяются также комбинированные среды, содержащие не один углевод, а два или три, например, среда Олькеницкого. Одна пробирка этой среды заменяет скошенный агар и среды Гисса с лактозой, глю­козой и сахарозой. После стерилизации в расплавленном виде среду в пробирке скашивают так, чтобы получился столбик и скошенная часть. Посев производится штрихом по скошенной части и уколом в столбик. При сбраживании лактозы или сахарозы изменяется цвет всей среды, при сбраживании одной глюкозы изменяется цвет только столбика. Образование газа определяется по наличию пузырьков в столбике ага­ра. При выделении микробами аммиака цвет среды не меняется. Образование сероводорода проявляется почернением в столоике агара

Для экспресс-метода определения ферментативной активности бак­терий применяются микротестсистемы и система индикаторная бумаж­ная (СИБ)

Микротестсистема представляет собой контейнер из прозрачного полистирола, состоящий из нескольких ячеек Ячейки содержат высу­шенные питательные среды с углеводами и индикаторами рН В каж­дую ячейку засевают взвесь культуры бактерий определенной густо­ты В контрольные ячейки наливают физ раствор Результат учитыва­ют после 3 — 4-хчасовой инкубации в термостате по изменению цвета

Системы индикаторные бумажные (СИБ) для идентификации се­мейства энтеробактерий представляет собой диски или полоски хроматографической бумаги, покрытые защитной пленкой и содержащие определенный субстрат и индикатор В пробирки с физиологическим или буферным раствором вносят исследуемую культуру, затем поме­щают диски В контрольные пробирки культуру бактерий не вносят Результат учитывают по изменению цвета индикатора Для определе­ния сероводорода диск помещают на поверхность МПА, засеянного уколом, что позволяет одновременно определить подвижность

Во всех пробирках учитывают предварительный результат в тот же день и окончательный — на следующий день

Оксидазная активность определяется путем растирания культуры на индикаторной бумажке Результат учитывается через минуту.

Физиология микроорганизмов. Химический состав микробов

Главная > Контрольная работа >Биология

Двухфазный рост бактерий. Диауксия. Рост без деления. бактерий.

Двухфазный рост. У бактерий, способных использовать два различных источника углерода, наблюдают двухфазный рост (так называемая диауксия). Примером может служить рост кишечной палочки на среде с глюкозой и сорбитолом.

• Для подобных микроорганизмов характерен начальный пик роста, в течение которого бактерии утилизируют только один углевод.

• После исчерпания его запасов наступает стационарная фаза, в течение которой в культуре инициируются синтез ферментов и механизмы транспорта для утилизации второго углевода.

• Если физиологические условия удовлетворительны, в бактериальной культуре начинается фаза вторичного экспоненциального роста, инициированная утилизацией второго углевода.

Рост и размножение бактерий

Рост бактерий – увеличение бактериальной клетки в размерах без увеличения числа особей в популяции. Многие факторы — детергенты, антибиотики, соли жёлчных кислот, УФ-облучение — задерживают деление клеток. В результате образуются длинные нитевидные формы, значительно превышающие по размерам исходные клетки.

Размножение бактерий – процесс, обеспечивающий увеличение числа особей в популяции. Бактерии характеризуются высокой скоростью размножения.

Рост всегда предшествует размножению. Бактерии размножаются поперечным бинарным делением, при котором из одной материнской клетки образуются две одинаковые дочерние.

Процесс деления бактериальной клетки начинается с репликации хромосомной ДНК. В точке прикрепления хромосомы к цитоплазматической мембране (точке-репликаторе) действует белок-инициатор, который вызывает разрыв кольца хромосомы, и далее идет деспирализация ее нитей. Нити раскручиваются, и вторая нить прикрепляется к цитоплазматической мембране в точке-прорепликаторе, которая диаметрально противоположна точке-репликатору. За счет ДНК-полимераз по матрице каждой нити достраивается точная ее копия. Удвоение генетического материала – сигнал для удвоения числа органелл. В септальных мезосомах идет построение перегородки, делящей клетку пополам.

Двухнитевая ДНК спирализуется, скручивается в кольцо в точке прикрепления к цитоплазматической мембране. Это является сигналом для расхождения клеток по септе. Образуются две дочерние особи.

Размножение бактерий определяется временем генерации. Это период, в течение которого осуществляется деление клетки. Продолжительность генерации зависит от вида бактерий, возраста, состава питательной среды, температуры и др.

Фазы размножение бактериальной клетки на жидкой питательной среде:

1) начальная стационарная фаза; то количество бактерий, которое попало в питательную среду и в ней находится;

2) лаг-фаза (фаза покоя); продолжительность – 3–4 ч, происходит адаптация бактерий к питательной среде, начинается активный рост клеток, но активного размножения еще нет; в это время увеличивается количество белка, РНК;

3) фаза логарифмического размножения; активно идут процессы размножения клеток в популяции, размножение преобладает над гибелью;

4) максимальная стационарная фаза; бактерии достигают максимальной концентрации, т. е. максимального количества жизнеспособных особей в популяции; количество погибших бактерий равно количеству образующихся; дальнейшего увеличения числа особей не происходит;

5) фаза ускоренной гибели; процессы гибели преобладают над процессом размножения, так как истощаются питательные субстраты в среде. Накапливаются токсические продукты, продукты метаболизма. Этой фазы можно избежать, если использовать метод проточного культивирования: из питательной среды постоянно удаляются продукты метаболизма и восполняются питательные вещества.

Рост бактериальной культуры.

Оценка роста бактерий

Количественную оценку роста обычно проводят в жидких средах, где растущие бактерии образуют гомогенную суспензию. Увеличение количества клеток устанавливают, определяя концентрацию бактерий в 1 мл, либо определяют увеличение клеточной массы в весовых единицах, отнесённых к единице объёма.

Подсчёт микроорганизмов можно проводить непосредственно под микроскопом с использованием различных счётных камер (например, Петрова-Хаузера или Горяева).

Кроме состава питательных сред, на которых развиваются бактерии, большое значение имеют условия культивирования и, прежде всего, температура, аэрация и концентрация водородных ионов в среде.

В количественном отношении придерживаются простого правила: соотношение важнейших элементов, вводимых в воду, должно быть примерно таким же, как в бактериальной клетке (например, среднее соотношение углерод:азот:фосфор:сера:калий:кальций:магний:железо = 5:1:0,3:0,1:0,1:0,05:0,05:0,02. В граммах эти величины дают примерное содержание элементов на 1 л среды).

Питательные среды являются основой бактериологических исследований. Они служат для выделения из исследуемого материала чистых культур микробов, для изучения их свойств. На питательных средах создаются оптимальные условия для размножения микроорганизмов. В состав сред должны входить вещества, необходимые для построения всех компонентов цитоплазмы, т.е. все источники роста живого организма. Сюда, в первую очередь, относятся источники азота, углерода, водорода и кислорода.

Источник водорода и кислорода в питательных средах — вода.

Источником азота служат органические соединения, которые получают из мяса, рыбы, плаценты, молока, яиц, крови. В результате гидролиза панкреатином или трипсином из этих продуктов получаются т.н. гидролизаты, содержащие большое количество аминокислот и пептонов, которые хорошо усваиваются большинством микроорганизмов. Нативный белок усваивают только некоторые микроорганизмы, имеющие экзопротеазы. Гидролизаты являются основой для приготовления сред для многих микроорганизмов.

Источником углерода для патогенных микробов являются, главным образом, различные углеводы: моно- и дисахара, многоатомные спирты, органические кислоты и их соли.

Кроме органогенов, бактериям необходимы неорганические соединения, содержащие фосфор, калий, серу, натрий, магний, железо, а также микроэлементы: кобальт, йод, марганец, бор, цинк, молибден, медь и др.

Потребность микроорганизмов в неорганических соединениях удовлетворяется прибавлением к питательной среде солей КН 2 РO 4 ; К 2 НРO 4 и др. Микроэлементы, выполняющие роль катализаторов химических процессов, необходимы в ничтожно малых количествах и поступают в питательную среду с пептоном, неорганическими солями и водой. Наряду с перечисленными органическими элементами, многие микроорганизмы нуждаются в факторах роста , т.е. в веществах, которые они сами не могут синтезировать. Факторы роста необходимо добавлять в питательные среды в готовом виде. К факторам роста относятся различные витамины, источником которых в питательных средах являются прибавленные к питательной среде продукты растительного и животного происхождения, содержащие в своем составе никотиновую, пантотеновую, парабензойную кислоты, витамины А, В, С и др.

Читать еще:  Как правильно выращивать капусту в открытом грунте?

Питательные вещества микробами могут усваиваться только при определенной реакции среды, т.к. проницаемость оболочек микробных клеток изменяется в зависимости от рН среды.

Требования, предъявляемые к питательным средам.

1. Питательные среды должны содержать необходимые для питания микробов питательные вещества.

2. Иметь реакцию рН, оптимальную для выращиваемого вида микроба. —

3. Питательные среды должны иметь достаточную влажность и вязкость, т.к. микробы питаются по законам диффузии и осмоса.

4. Обладать изотоничностью и иметь определенный окислительно-восстановительный потенциал (гН2).

5. Питательные среды должны быть стерильными, обеспечивая тем самым возможность выращивания чистых культур.

Потребность в питательных веществах и физических условиях у различных видов микробов неодинакова, и этим исключается возможность создания универсальной питательной среды.

По консистенции различают плотные и жидкие питательные среды. Плотные готовят на основе жидких посредством прибавления к ним клеевых веществ: агар-агара или желатина. Агар-агар (по-малайски — желе) — продукт растительного происхождения, добывается из морских водорослей. В воде агар-агар растворяется при температуре 80-86°С, затвердевает при 36-40 , и поэтому используется для уплотнения питательных сред для выращивания разных групп микроорганизмов при оптимальной для них температуре.

Классификация питательных сред производится по их составу и назначению

1. По составу питательные среды делятся на простые и сложные

Также по составу выделяют белковые, безбелковые и минеральные среды. 2. П о происхождению среды разделяют на искусственные и естественные (природные ).

Естественные питательные среды могут содержать компоненты животного (например, кровь, сыворотка, жёлчь) или растительного (например, кусочки овощей и фруктов) происхождения.

Консервирующие питательные среды предупреждают отмирание патогенов и подавляют рост сапрофитов. Наибольшее применение нашли глицериновая смесь, гипертонический раствор, глицериновый консервант с LiCl 2 , раствор цитрата натрия и дезоксихолата натрия.

Среды обогащения для бактерий

Среды обогащения (например, среда Китта-Тароцци, селенитовый бульон, тиогликолевая среда) применяют для накопления определённой группы бактерий за счёт создания условий, оптимальных для одних видов и неблагоприятных для других. Наиболее часто в качестве подобных агентов используют различные красители и химические вещества — соли жёлчных кислот, тетратионат Na+, теллурит К , антибиотики, фуксин, генциановый фиолетовый, бриллиантовый зелёный и др.

Также по назначению различают среды элективные, специальные и дифференциально-диагностические.

Среды элективные (селективные, избирательные, накопления, обогащения). Принцип создания элективных питательных сред основан на удовлетворении основных биохимических и энергетических потребностей того вида микроба, для культивирования которого они предназначены, или на добавление ингибиторов, подавляющих рост сопутствующей микрофлоры. Определенный состав и концентрация питательных веществ, микроэлементов, ростовых факторов при строго определённом значении pH или добавлении ингибиторов обеспечивают оптимальные условия для выращивания одного или нескольких видов микроорганизмов. При посеве на них материала, содержащего смесь различных микробов, раньше всего будет проявляться рост того вида, для которого среда будет элективной. Примером элективных сред являются желчный бульон, селенитовый бульон, среда Плоскирева – для выращивания микробов семейства кишечных, щелочная пептонная вода – для холерного вибриона.

Желчный бульон . К МПБ добавляют 10-20% бычьей желчи. Желчь подавляет рост коков и воздушной флоры, но благоприятна для размножения сальмонелл.

Селенитовый бульон . Состоит из фосфатного бульона с добавлением натриевой соли селенита, которая является ингибитором роста кокковой флоры, кишечной палочки, но не задерживает роста сальмонелл.

Среда Плоскирева . Плотная среда, содержащая ингибиторы кишечной палочки, коков, но благоприятная для роста шигелл и сальмонелл, размножение которых не тормозится бриллиантовым зелёным и желчными солями.

Пептонная вода . Содержит 1% пептона и 0,5% хлористого натрия. Среда является элективной для холерных вибрионов, т.к. они лучше других бактерий размножаются на “голодных средах”, особенно при щелочной реакции, потому что сами выделяют кислые продукты жизнедеятельности.

Специальные среды. Необходимы для культивирования бактерий, не растущих на простых питательных средах. Для некоторых организмов к простым питательным средам необходимо добавлять углеводы, кровь и др. дополнительные питательные вещества. Примерами простых питательных сред являются сахарный бульон и сахарный агар для стрептококка (готовится соответственно из МПБ и МПА, к которым добавляется 0,5-2% глюкозы).

Для пневмококков и менингококков специальной средой являются сывороточный бульон и сывороточный агар (для приготовления сывороточного бульона смешивают 1 часть МПБ с 2 частями свежей сыворотки, для получения, сывороточного агара к расплавленному МПА добавляется 10-25% стерильной лошадиной или бычьей сыворотки).

Дифференциально-диагностические среды используют для определения видовой принадлежности исследуемого микроба, основываясь на особенностях его обмена веществ. По своему назначению дифференциально-диагностические среды разделяют следующим образом:

1. Среды для выявления протеолитической способности микробов, содержащие в своем составе молоко, желатин, кровь и т.д.

2. Среды с углеводами и многоатомными спиртами для

обнаружения различных сахаролитических ферментов.

В состав дифференциально-диагностических сред, предназначенных для выявления сахаролитических свойств и окислительно-восстановительных ферментов, вводят индикаторы: нейтральную красную, кислый фуксин, бромтимоловый синий, водный голубой с розоловой кислотой (ВР). Изменяя свою окраску при различных значениях рН, индикатор указывает на наличие фермента и расщепление введённого в среду ингредиента.

Примеры дифференциально-диагностических сред:

Среда Эндо . Состоит из МПА с добавлением 1% лактозы и обесцвеченного сульфитом натрия основного фуксина (индикатор). Среда Эндо имеет слаборозовый цвет. Используется в диагностике кишечных инфекций для дифференциации бактерий, разлагающих лактозу с образованием кислых продуктов, от бактерий, не обладающих этой способностью. Колонии лактозопозитивных микробов (кишечная палочка) имеют красный цвет вследствие восстановления фуксина. Колонии лактозонегативных микроорганизмов — сальмонелл, шигелл и др. -бесцветны.

К дифференциально-диагностическим средам относятся короткий и развёрнутый пёстрый ряд . Он состоит из сред с углеводами (среды Гисса), МПБ, молока, мясопептонной желатины.

Среды Гисса готовятся на основе пептонной воды, к которой прибавляются химически чистые моно-, ди- или полисахариды (глюкоза, лактоза, крахмал и др.).

Для обнаружения сдвигов рН в результате образования кислот и разложения углевода в среды прибавляют индикатор. При более глубоком расщеплении углеводов образуются газообразные продукты (СО 2 , СН 4 и др.), которые улавливаются при помощи поплавков — маленьких пробирочек, опущенных в среду кверху дном. Среды с углеводами могут готовиться и плотными – с добавлением 0,5-1% агар-агара. Тогда газообразование улавливается по образованию пузырьков (разрывов) в столбике среды.

На МПБ, входящем в пёстрый ряд, обнаруживают продукты, образующиеся при расщеплении аминокислот и пептонов (индол, сероводород). Сероводород обнаруживается путем помещения в МПБ после засева культуры полоски фильтровальной бумаги, пропитанной раствором уксуснокислого свинца. При расщеплении аминокислот, содержащих серу, выделяется сероводород, бумажка чернеет за счёт образования сернистого свинца. Для определения индола можно использовать сложный индикатор. Индол образуется при расщеплении триптофана, и его можно обнаружить при добавлении к культуре, выращенной на МПБ, этого индикатора. При наличии индола МПБ окрашивается в зеленый или синий цвет.

В практических бактериологических лабораториях широко применяют микро- и экспресс-методы для ориентировочного изучения биохимических свойств микроорганизмов. Для этой цели существует множество тест-систем. Наиболее часто используют систему индикаторных бумаг (СИБ). СИБы представляют из себя диски фильтровальной бумаги, пропитанные растворами сахаров или других субстратов в сочетании с индикаторами. Такие диски опускают в пробирку с выросшей в жидкой питательной среде культурой. По изменению цвета диска с субстратом судят о работе фермента. Микро-тест системы для изучения идентификации энтеробактерий представлены одноразовыми пластиковыми контейнерами со средами, содержащими различные субстраты, с добавлением индикаторов. Посев чистой культуры микроорганизмов в такие тест-системы позволяет быстро выявить способность бактерий утилизировать цитраты, глюкозу, сахарозу, выделять аммиак, индол, разлагать мочевину, лизин, фенилаланин и т.д.

Питательный агар, а также основные дифференциально-диагностические среды выпускаются в настоящее время в виде сухих препаратов, содержащих все необходимые составные части. К таким порошкам нужно добавить только воду и сварить, а затем, после разливки, простерилизовать.

Температура роста бактерий.

Оптимальная температура роста патогенных для человека микроорганизмов совпадает в основном с температурой тела человека.

В отдельных случаях температурный параметр может быть использован как простой способ селекции, например, виды Campylobacter лучше растут при температуре 42 0 С, слишком высокой для роста большинства других патогенов.

В зависимости от требований к температурному режиму бактерии разделяют на три группы:

Мезофильные бактерии лучше всего растут в пределах 20-40 0 С; к ним относят большинство патогенных для человека микроорганизмов.

Термофильные бактерии лучше растут при 50-60 0 С.

Психрофильные бактерии предпочитают расти в интервале температур от 0 до 10 0 С.

Величина рН необходимая для роста бактерий.

Установление и поддержание определённой величины рН (логарифм величины, обратной концентрации водородных ионов в молях на литр) имеет существенное значение для роста бактерий. Подавляющее большинство микроорганизмов хорошо растёт при нейтральном рН, равном 7,0. Актиномицеты и бактерии, разлагающие мочевину, предпочитают среды с более высоким рН, то есть слегка щелочные. Некоторые бактерии толерантны к кислой среде (например, лактобациллы). Кислые значения рН предпочитают грибы.

Поддержание рН особенно необходимо для микроорганизмов, продуцирующих кислоты, но не обладающих устойчивостью к ним (кишечные бактерии и псевдомонады). Определённое буферное действие оказывают фосфаты, при более сильном выделении кислот рекомендуется добавлять к среде карбонат кальция или бикарбонат натрия. Нарушение метаболизма при неблагоприятных значениях рН не связано с прямым действием ионов Н+ и ОН». Они лишь снижают степень диссоциации слабых кислот и оснований, которые в недиссоциированном состоянии легче проникают в клетку, чем продукты их диссоциации.

Патогенные микроорганизмы и их основные характеристики

Инфекция – сложный биологический процесс, возникающий в результате проникновения патогенных микробов в организм и нарушения постоянства его внутренней среды. Возникновение инфекции зависит от нескольких факторов: степени патогенности (вирулентности) микроба, состояния макроорганизма и условий внешней среды.

Патогенность – это способность микроба определенного вида при соответствующих условиях вызывать характерное для него инфекционное заболевание. Следовательно, патогенность есть видовой признак.

Вирулентность – это степень патогенности определенного штамма микроба, т. е. индивидуальный признак. Например, бацилла сибирской язвы является патогенной, так как обладает свойством вызывает заболевание сибирской язвой. Но штамм одной культуры вызывает заболевание и смерть через 96 часов, а другой – через 6-7 дней. Следовательно, вирулентность первого штамма более высокая, чем второго.

Вирулентность микроба может быть повышена путем его пассажей через чувствительный организм лабораторных животных, т.е. последовательным заражением ряда животных (после гибели первого зараженного животного выделенными из него микробами заражают следующее животное и т.д.). В естественных условиях вирулентность бактерий повышается путем пассажа через восприимчивый организм, поэтому больных заразной болезнью необходимо немедленно изолировать от здоровых. Снизить вирулентность микроба в лабораторных условиях можно путем пересевов и выращивания на питательных средах при повышенной температуре или при добавлении в среду некоторых химических веществ (бычья желчь, слабый раствор карболовой кислоты и пр.). Основываясь на этом принципе, готовят ослабленные живые вакцины, которые затем применяют против заразных болезней. Вирулентность микроба может понижаться и в естественных условиях под действием солнечных лучей, высушивания и пр. Таким образом, вирулентность как мера патогенности – величина переменная. Она может быть повышена, понижена и даже утеряна. Патогенность как особое качество болезнетворного вида микроба проявляется в агрессивных его свойствах и в токсическом действии на организм. Агрессивность – это способность патогенного микроба жить, размножаться и распространяться в организме, противостоять неблагоприятным влияниям, оказываемым организмом. Некоторые патогенные микробы, размножаясь в организме или на питательной среде в пробирке, вырабатывают растворимые продукты, получившие название агрессины. Назначение агрессинов — подавлять действие фагоцитов. Сами агрессины безвредны для организма, но если их прибавить к несмертельной дозе культуры соответствующего микроба, они вызывают смертельно протекающую инфекцию.

Токсичность – способность патогенного микроба вырабатывать и выделять ядовитые вещества, вредно действующие на организм. Токсины бывают двух видов – экзотоксины и эндотоксины.

Экзотоксины – выделяются в окружающую среду при жизни микробов в организме или на искусственных питательных средах, а также в пищевых продуктах. Они очень ядовиты. Например, 0,005 мл жидкого столбнячного токсина или 0,0000001 мл ботулинического токсина убивает морскую свинку. Микробы, способные образовывать токсины, получили название токсигенных Под влиянием нагревания и света экзотоксины легко разрушаются, а под действием некоторых химических веществ теряют токсичность. Эндотоксины прочно связаны с телом микробной клетки и освобождаются только после ее гибели и разрушения. Они весьма устойчивы при действии высоких температур и не разрушаются даже после нескольких часов кипячения. Ядовитое действие многих бактерийных экзотоксинов связано с ферментами – лецитиназой (разрушает эритроциты), коллагеназой, гиалуронидазой (расщепляет гиалуроновую кислоту) и рядом других ферментов, которые производят в организме разрушение жизненно важных соединений. Условленно также, что некоторые патогенные бактерии (дифтерийные стафилококки и стрептококки) продуцируют фермент дезоксирибонуклеазу В процессе жизнедеятельности патогенные микробы выделяют и другие вещества, обусловливающие их вирулентность.

Читать еще:  Что выгоднее всего выращивать в теплицах круглый год?

Пути внедрения патогенных микробов в организм

Место проникновения патогенных микробов в организм называется входными воротами инфекции. В естественных условиях заражение происходит через пищеварительный тракт (алиментарный путь), когда в пищу или в воду попадают патогенные микроорганизмы. Болезнетворное начало может проникать через поврежденные, а при некоторых инфекционных болезнях (бруцеллез) и неповрежденные слизистые оболочки рта, носа, глаз, мочеполовых путей и кожу. Судьба патогенных микробов, попавших в организм, может быть различной – в зависимости от состояния организма и вирулентности возбудителя. Некоторые микробы, попав с током крови в определенные органы, оседают (задерживаются) в их тканях, размножаются в них, выделяют токсины и вызывают заболевание. Например, возбудитель туберкулеза в легочной ткани. Любая инфекционная болезнь, независимо от клинических признаков и локализации микроба в организме, представляет собой заболевание всего организма. Если патогенные микробы проникли в кровеносные сосуды и начинают размножаться в крови, то они очень быстро проникают во все внутренние органы и ткани. Такую форму инфекции называют септицемией. Она характеризуется быстротой и злокачественностью течения и нередко заканчивается смертельным исходом. Когда микробы находятся в крови временно и не размножаются в ней, а посредством ее только переносятся в другие чувствительные ткани и органы, где затем уже размножаются, инфекцию принято называть бактериемией. Иногда микробы, проникнув в организм, остаются только в поврежденной ткани и, размножаясь выделяют токсины. Последние, проникая в кровь, вызывают общее тяжелое отравление (столбняк, злокачественный отек). Такой процесс называется токсемией. Пути выделения патогенных микробов из организма также различны: со слюной, мокротой, мочой, калом, молоком, выделениями из родовых путей.

Условия возникновения инфекций и значение состояния организма в этом процессе

Для возникновения инфекционного процесса требуется минимально заражающая доза микроба; однако чем больше проникло в организм микробов, тем скорее развивается болезнь. Чем вирулентнее микроб, тем быстрее наступают все клинические признаки болезни. Имеют значение и ворота инфекций. Например, после введения в легкие морской свинки 1 – 2 туберкулезных микробов может возникнуть заболевание, а чтобы вызвать заболевание путем подкожной инъекции микробов, надо ввести не меньше 800 живых туберкулезных палочек.

Одно из необходимых условий для возникновения заболевания – восприимчивость организма к данной инъекции очень восприимчивы, а к другим устойчивы. Например, крупный рогатый скот не заражается сапом лошадей, а чума свиней совершенно неопасно в смысле заражения для человека. Исключительно важное значение для возникновения инфекционного процесса имеет состояние организма. И.И.Мечников писал: «Болезнь, помимо внешних причин – микробов, обязана своим происхождением еще и внутренним условиям самого организма. Болезнь наступает тогда, когда эти внутренние причины оказываются бес сильными помешать развитию болезнетворных микробов; когда они, наоборот, успешно борются с микробами, то организм оказывается невосприимчивым. Проникновение патогенного микроба в чувствительный организм вовсе не обязательно вызывает соответствующее заболевание». Устойчивость организма против инфекции снижается при плохом питании. Влияет также простудный фактор, перегревание, радиация, отравление алкоголем и пр. Течение инфекционного заболевания Инфекционный процесс проявляется не сразу после внедрения патогенного микроба в организм, а спустя некоторый срок. Время от внедрения микробов в организм до появления первых клинических признаков заболевание называют скрытым, или инкубационным, периодом. Продолжительность его определяется вирулентностью и количеством внедрившихся микробов, воротами инфекции, состоянием организма и окружающими условиями. За период инкубации внедрившиеся микробы размножаются, производят качественные биологические изменения в организме, в результате чего появляются клинические признаки. По длительности течения инфекции бывают острые, кратковременно протекающие (ящур, холера, сибирская язва и многие др.). Большинство инфекций относится к острым. Инфекционные болезни людей и животных могут наблюдаться в виде единичных случаев, именуемых спорадическими. Когда инфекция быстро распространяется среди людей и охватывает населенные пункты значительной территории, такое распространение инфекции принято называть – эпидемия, соответственно инфекция среди животных – эпизоотия. Инфекционные болезни по природе отличаются от других заболеваний следующими свойствами: наличием живого возбудителя, заразительностью (передаются от больных здоровым), инкубационным периодом, иммунитетом (невосприимчивостью) переболевших. Последний наступает не всегда.Источники и пути распространения инфекции Основной источник и переносчик заразного начала – больной организм. От больного могут заражаться люди, животные. Зараженная почва может быть источником заражения. Болезни, при которых заражение происходит в результате попадания патогенных микробов из почвы, получили название почвенных инфекций (сибирская язва, газовая гангрена и др.)

Автор: Тайша Әсем Шарафиқызы

ГП на ПХВ Областная инфекционная больница

бактериологическая лаборатория –бак лаборантка

Статьи

Питательные среды

Культивирование, дифференциация и выделение отдельных видов микроорганизмов стало возможным лишь с применением питательных сред. Это особые субстанции, которые создают благоприятные условия для размножения и роста определенного вида микробов и грибов, то есть чистых культур, что открывает возможность изучения их свойств и влияния на организм.

Сегодня питательные среды применяются как в медицине, так и в иных областях, например, в пищевой промышленности, где используются различные виды микроорганизмов для улучшения качества продуктов питания, увеличения срока годности, вкусовых и ароматических свойств. Так, чистые культуры, выделенные посредством использования питательных сред, применяются на хлебобулочных производствах, в винно-водочной промышленности, при создании сыров и молочных продуктов, для получения органических кислот, при квашении и консервации овощей и фруктов, в фармакологии.

Однако большая часть микробиологических исследований приходится на медицинский сектор. Именно поэтому основным покупателем субстратов являются клиники и лаборатории.

Компания БиоВитрум ведущий производитель и поставщик медицинского, диагностического и лабораторного оборудования, а также расходных материалов. Одно из направлений деятельности – это изготовление питательных сред для культивирования и выращивания микроорганизмов. Продукция компании производится из высококачественного сырья, которое содержит компоненты лошадиной и бараньей крови. Преимуществом, поставляемого из Великобритании исходного материала, являются особые условия, в которых выращивают животных. Их корма не содержат антибиотиков, что гарантирует стерильность питательных сред.

БиоВитрум предлагает купить питательные среды всех типов, которые соответствуют европейским стандартам.

Требования, предъявляемые к средам

Производимые сегодня субстраты, применяемые в целях культивирования, дифференциации и выделения микроорганизмов, должны соответствовать определенным показателям:

  • Питательность. Среда обладает жизненно важными для питания и удовлетворения энергетических потребностей, выращиваемых культур. А именно, содержит витамины, минеральные и органические (натуральные) вещества, микроэлементы, входящие в клеточный состав и активизирующие выработку ферментов и не вырабатываемые естественным путем аминокислоты.
  • Наличие водородных ионов. Поскольку микроорганизмы способны питаться только при условии проницаемости клеточной оболочки, то для ее обеспечения необходим оптимальный pH баланс.

Для патогенных микробов нужна слабощелочная питательная среда, для возбудителей туберкулеза пригодной является слабокислотная реакция.

  • Буферность среды. Это свойство обеспечивает стабильность pH баланса, нейтрализуя продукты распада.
  • Изотоничность – показатель давления внутри клетки и в среде, который должен находиться на одинаковом уровне для большинства микроорганизмов.
  • Стерильность среды. Важно исключить наличие посторонних микробов, которые способны оказать влияние на рост интересующей культуры.

Среды должны иметь влажность, поэтому плотные и сухие среды требуют предварительной подготовки. Среды должны обладать окислительно-восстановительными характеристиками, прозрачностью. Такой показатель, как унифицированность обеспечивает возможность выращивания различных микроорганизмов.

Классификация

Каждая культура нуждается в определенных условиях для обильного размножения клеток, их интенсивного роста и оптимального развития, поэтому сложно создать универсальную среду. Помимо этого, в зависимости от целей проводимых исследований, изменяются параметры питательной среды.

Сегодня созданы несколько разновидностей сред, отличающихся свойствами:

  • По составу исходных компонентов их классифицируют на синтетические и натуральные. Последние изготовляются из растительного либо животного сырья. Для снижения себестоимости используются непищевые продукты, например, костную муку или сгустки свернувшейся крови. Синтетические получают из органических, то есть натуральных и минеральных компонентов.
  • По консистенции Среды делятся на жидкие, плотные, полужидкие. Увеличение густоты осуществляется посредством добавления желатина или агар-агара. Последний ингредиент не является для микробов питательным веществом, его задача состоит в создании оптимальной плотности. При этом температура плавления агара достигает 80-100 градусов, что позволяет выращивать на средах с его содержанием микроорганизмы, нуждающиеся в создании парниковых условий. Желатин же представляет собой животный белок, поэтому субстраты с его содержанием можно применять в условиях комнатной температуры. К плотным субстанциям относят свернувшуюся сыворотку крови, яичный белок, картофель. Некоторые производятся в виде порошков и требуют перед употреблением растворения и доведения до нужной консистенции.
  • Состав питательных сред бывает простым и сложным. Первые представляют собой мясопептоидные бульоны, питательный желатин, пептоидные воды. Второй тип, кроме исходных компонентов, включает вещества, способствующие росту тех или иных бактерий. Существуют и специальные среды, используемые там, где не возможен рост бактерий на обычной субстанции.
  • Элективные питательные среды. Применяются для выделения конкретного типа бактерий за счет подавления роста других. Жидкие среды этой категории называют накопительными.
  • Дифференциально-диагностические среды используют для выделения одной культуры по ее ферментативной активности. Консервирующие субстраты используются при транспортировке материалов к месту исследования.

Приготовление сред

От качества питательной среды зависит точность полученных результатов, поэтому кроме соблюдения рецептуры, необходимо придерживаться следующих требований:

  • Стерильность посуды. В производственных условиях, где изготовление осуществляется масштабно, варка сред проводится в специальных котлах. В лабораториях, когда необходимо получить небольшое количество питательных сред следует использовать эмалированную или стеклянную посуду, которая не выделяет кислоты и щелочи. Предварительно все резервуары моют, прополаскиваю и высушивают.
  • Ранее не использованная стеклянная посуда подвергает стерилизации в хлороводородистой кислоте, в которой оставляется на ночь, после чего прополаскивается в соответствии с установленным режимом.

Сам процесс приготовления питательных сред состоит из следующих этапов:

  • Варка, которая осуществляется либо на огне и водяной бане (для лабораторных условий), либо в котлах и автоклавах с подачей пара (в промышленных масштабах).
  • Установка оптимального pH соотношения требует использования бумажных индикаторов, потенциометров, стеклянных электродов.
  • Осветление осуществляется при помощи введения в субстрат, взбитого с водой, яичного белка или кровяной сыворотки, которые в процессе варки увлекают в осадок взвешенные частицы.
  • Фильтрации подвергаются жидкие среды, и на основе расплавленного желатина. Для этого используют тканевые и бумажные увлажненные фильтры. Существенно затрудняется очистка агаровых субстратов, поскольку основной компонент быстро застывает. Поэтому этот процесс чаще заменяется отстаиванием.
  • Стерилизация осуществляется для каждого субстрата в определенный промежуток времени и при необходимой температуре. Эти параметры указаны рецептуре приготовления.

Завершающим этапом является расфасовка питательных сред в посуду – это флаконы, пробирки, чашки Петри. Сосуд заполняется только на 2/3 поскольку при стерилизации среда увеличивается в объеме и может достичь пробки, что повлияет на чистоту и свойства субстрата.

Разливается продукт с использованием воронок, шприцев, пипеток или иных приспособлений.

Каждый сосуд маркируется. На сосуды наносится название продукта, указывается количество и дата производства.

Готовая среда проходит несколько ступеней контроля. Первые испытания на стерильность осуществляются путем помещения продукции в термостат.

Птательная среда отправляется в лаборатории для проведения химических испытаний, целью которого является установление точного pH уровня.

Проводится биологический контроль, который заключается в определении питательных качеств среды.

Виды питательных сред

По своему назначению производимые сегодня питательные составы среды можно разделить на следующие категории:

  • Универсальные среды. Они подходят для размножения различного типа культур.
  • Селективные или избирательные среды. Используются для выделения одного вида микроорганизмов.
  • Дифференциально-диагностические среды, которые открывают возможность отличить бактерии по их ферментативным свойствам, то есть продуктам жизнедеятельности.
  • Специальные среды. Применяются для выращивания тех культур, которые неспособны размножаться на универсальных субстратах.
  • Дифференциально-селективные средыиспользуются для оперативной идентификации бактерий.
  • Полусинтетические питательные составы среды, в состав которых вводят компоненты природного происхождения.

Компания БиоВитрум предлагает широкий ассортимент питательных сред, которые поставляют как во флаконах различного объема, так и в готовом виде в чашках Петри. Последние закупориваются специально разработанной целлюлозной пленкой, которая обеспечивает стерильность среды и срок годности, достигающий 60 дней.

Преимуществом компании БиоВитрум является оперативность поставок, конкурентоспособные цены, соответствие стандартам ГОСТ. Все питательные составы среды изготовляются на собственных мощностях, оснащенных высокотехнологичным оборудованием из сырья Oxoid LTD известного производителя Великобритании.

В компании БиоВитрум можно приобрести 18 наименований продуктов, представленных в каталоге, которые проходя многоступенчатый контроль. Продукция поставляется с полным комплектом документации и маркировкой на русском языке.

голоса
Рейтинг статьи
Ссылка на основную публикацию
ВсеИнструменты
Adblock
detector